人Bcl-2相關(guān)X蛋白（BAX）試劑盒實驗使用說明

操作步驟

1.標準品的稀釋：本人Bcl-2相關(guān)X蛋白BAX試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.洗滌：人Bcl-2相關(guān)X蛋白BAX小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

人Bcl-2相關(guān)X蛋白BAX操作程序總結(jié)：

1.準備試劑，樣品和標準品

2.加入準備好的樣品和標準品，37℃反應(yīng)30分鐘

3.洗板5次，加入酶標試劑，37℃反應(yīng)30分鐘

4.洗板5次，加入顯色液A、B，37℃反應(yīng)10分鐘

5.加入終止液

6.15分鐘之內(nèi)度OD值

7.計算

計算

人Bcl-2相關(guān)X蛋白BAX以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。